Acetylo-CoA nie może być substratem w reakcji glukoneogenezy, ponieważ reakcja pomostowa, w wyniku której powstaje ten związek, jest nieodwracalna. Dlatego też, acetylo-CoA nie może być przekształcony w pirogronian, a przez to nie może być źródłem glukozy.
Glukoneogeneza - zachodzący w cytozolu enzymatyczny proces przekształcania niecukrowcowych prekursorów, jak np. aminokawsy glukozę. Reakcja ta zachodzi głównie w hepatocytach, a zasadniczym punktem wejścia substratów do tego szlaku jest pirogronian. Podczas glukoneogenezy wytwarzane są duże ilości energii i utrzymywane jest odpowiednie stężenie glukozy we krwi w warunkach jej niedoboru.
Acetylo-CoA to połączenie koenzymu A z resztą acetylową . Uczestniczy on w wielu przemianach zachodzących w organizmie, np. w cyklu kwasu cytrynowego, zwanego inaczej cyklem Krebsa. POwstaje w yniku reakcji pomostowej w macierzy mitochondrialnej według następującego schematu:
[tex]pirogronian + CoA + NAD^+ - > acetylo-CoA + NADH + CO_2 + H^+[/tex]